胰脂肪酶是一種由動物或人類胰腺分泌的水 溶性脂肪分解酶，在甘油三酯的消化中發(fā)揮著重要胰脂肪酶是一種由動物或人類胰腺分泌的水 溶性脂肪分解酶，在甘油三酯的消化中發(fā)揮著重要發(fā)生率的逐年上升，藥物治療成為治療肥胖癥的有 效手段之一。

１ 材料與方法 

１．１ 儀器與軟件 

ＴＵ－１８１０紫外可見分光光 度 計（北 京 普 析 通 用 儀 器 有 限 責(zé) 任 公 司）；ＭｕｌｔｉＳｋａｎ ＦＣ酶標儀［賽默飛世爾科技（中國）有限公司］；QL-866渦旋混合器（海門市其林貝爾儀器制造有限公司）；ＤＺＫＷ－４電熱恒溫水浴鍋（北 京 中 興 偉 業(yè) 儀器有限 公 司）；ＦＡＩ６０４萬 分 之 一 天 平（上 海 天 平 儀器廠）；ＪＡ５００３Ｂ千分之一天平（上海越平儀器有 限公司）；ＳｉＧｍＡ 高速冷凍離心機（北京五洲東方科 技發(fā) 展 有 限 公 司）；Ｂｒａｎｄ 移 液 槍 （德 國 Ｂｒａｎｄ 公 司）；ＫＱ５２００Ｅ超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限 公司）；ＳＴＡＲＴＥＲ２１００ＰＨ 計（深圳市展華儀器儀 表 有 限 公 司 ）；ＧａｓｔｒｏｐｌｕｓＴＭ （Ｖｅｒｓｉｏｎ９．５．０００４ ＳｉｍｕｌａｔｉｏｎｓＰｌｕｓＩｎｃ．，Ｌａｎｃａｓｔｅｒ，ＣＡ，ＵＳＡ）； ＡＤＭＥＴＰｒｅｄｉｃｔｏｒＴＭ軟件（Ｖｅｒｓｉｏｎ８．１．０．０）。 

１．２ 試 劑 

豬 胰 脂 肪 酶 （上 海 源 葉 生 物 有 限 公 司）；對硝基苯基棕櫚酸酯（Ｐ－ＮＰＰ）（≥９８％，阿法埃 莎化學(xué)有限公司）；脫氧膽酸鈉（純度：＞９９．０％，上海江萊 生 物 科 技 有 限 公 司）；二 甲 基 亞 砜（ＤＭＳＯ） （北京鼎國昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司）；磷酸二氫 鈉、異丙醇、高 氯 酸（北 京 化 工 廠）、氫 氧 化 鈉（天 津 市光復(fù)科技發(fā)展有限公司）均 為 分 析 純；奧 利 司 他 （純度：≥９８％，中山萬漢醫(yī)藥科技有限公司）、新利 司他（純度：≥９８％，上海源葉生物科技有限公司）； 娃哈哈飲用純凈水（杭州集團娃哈哈有限公司）。 

１．３ 方法 

１．３．１ 胰脂肪酶溶液的制備 

精密稱定胰脂肪酶 １００ｍｇ，于 ５０ ｍＬ 離 心 管，加 入 １０ ｍＬ 冷 的 ５０ ｍｍｏｌ·Ｌ－１磷 酸 鹽－５ｍｍｏｌ·Ｌ－１脫 氧 膽 酸 鈉 緩 沖 液 （ｐＨ８．０），３０００ｒ·ｍｉｎ－１渦旋５ｍｉｎ，４ ℃下離心半 徑７．４ｃｍ，７０００ｒ·ｍｉｎ－１離心１０ｍｉｎ，傾出上清液 至一新的離心管，即得。使用時保存在０～６℃冰水 浴環(huán)境。 

１．３．２ 胰脂肪酶抑制劑ＩＣ５０的測定 

精密稱取奧 利司他、新 利 司 他 各 １０ ｍｇ 至 于 １０ ｍＬ 量 瓶 中， ＤＭＳＯ 溶解并 定 容，冷 藏 儲 存，使 用 前 取 出 室 溫 融 化，搖勻后以緩沖液稀釋得系列不同濃度的抑制劑 溶液（奧利司他終濃度０～２８８０ｎｍｏｌ·Ｌ－１；新利司 他終濃度０～６１４４ｎｍｏｌ·Ｌ－１）。分別?。埃常恚桃? 制劑溶液和上述已制備的酶溶液于試管中，加緩沖 液補至２．７ｍＬ，搖勻，３７ ℃水浴溫孵１５ｍｉｎ，加入 １ｍｍｏｌ·Ｌ－１ｐ－ＮＰＰ底物溶液０．３ｍＬ，３７℃水?。保? ｍｉｎ后立即于４０５ｎｍ 測定其吸光度，空白以等量不 含抑制劑的 溶 液 代 替，每 組 反 應(yīng) 平 行３次。ＩＣ５０計 算采用公式（１），其中 Ｋ 為曲線的上限值，ａ為增長 速度，采用三參數(shù)ｌｏｇｉｓｔｉｃ曲線擬合求解。

２ 結(jié)果

胰脂 肪 酶 作 用 于 Ｐ－ＮＰＰ分解出 對 硝 基 苯 酚 （Ｐ－ＮＰ），該 產(chǎn) 物 在 ４０５ ｎｍ 處有吸收峰，濃度 與 吸 光 值 成 正 比。測 定 奧 利 司他、新利司他在不同濃度條件下與酶反應(yīng)后的 吸光度，從 而 得 出 其 對 胰 脂 肪 酶 的 抑 制 活 性。奧 利司他、新利司他對胰脂肪酶的抑制考察，隨著抑制劑濃度的增大，抑 制 率 快速增大，最 大 抑 制 率 均 近１００％。采用 公 式（１） 計算得奧利司他的ＩＣ５０為１９．１ｎｍｏｌ·Ｌ－１，新利 司 他的ＩＣ５０為７６ｎｍｏｌ·Ｌ－１。

３ 討論 

奧利司他和新利司他作為強效的胃腸道脂肪 酶抑制劑，是目前公認的用于治療肥胖癥的藥 物。 本研究測定得 奧 利 司 他 的ＩＣ５０為１９．１ｎｍｏｌ·Ｌ－１， 新利司他的ＩＣ５０為７６ｎｍｏｌ·Ｌ－１，均為納摩爾級抑 制。盡 管ＩＣ５０對 評 估 藥 物 對酶的潛在抑制作用有較大的價值，但因其只能反 應(yīng)藥物－靶標結(jié)合的平衡狀態(tài)，不能反映整個結(jié)合的 動力學(xué)過程，且無法預(yù)測藥物對酶抑制的快慢和作 用持續(xù)的時間等，存在較大局限性使其無法與體內(nèi) 的藥效活性建立關(guān)聯(lián)。

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