紫草屬皮膚科要藥，臨床上紫草油被廣泛用于 各類血熱蘊(yùn)毒型皮膚創(chuàng)面。我國存在多種紫草制 劑，其中復(fù)方紫草油( 國藥準(zhǔn)字 Z20044385) 為目前 唯一的國藥準(zhǔn)字紫草油之制劑，臨床多用于燒燙傷、 尿布皮炎等病。該藥以麻油為基質(zhì)，主要組成包括 紫草、白芷、忍冬藤、冰片。以上組分中，冰片的抑菌 作用研究相對完備，體外抑菌實(shí)驗證實(shí)，冰片對變形 桿菌、金黃色葡萄球菌等均具有較好的抑制效果，但冰片在復(fù)方紫草油中濃度不超過 2. 5% ，目前尚 缺乏對其余三味主要成分的抑菌特點(diǎn)研究。另外， 因復(fù)方紫草油屬油劑，與抑菌實(shí)驗中菌平板的水相 基質(zhì)相斥，用常規(guī)直接打孔法無法體現(xiàn)抑菌結(jié)果，目 前復(fù)方紫草油的抑菌特點(diǎn)尚未研明。

金黃色葡萄球菌 ATCC29213 菌種 純培養(yǎng)物; 培養(yǎng)基按照常規(guī)方法制作。

紫草、白芷、忍冬藤飲片制成的 100 目細(xì)粉( 健民藥業(yè)提供) 。

乙醇( 95%、75%、50%、25%、 15% V/V 濃度) ，蒸餾水，生理鹽水，營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基 ( 北京奧博星生物技術(shù)有限公司，批號 20170412) ，瓊 脂粉 ( 北京奧博星生物技術(shù)有限公司，批 號 20180106) 。索式回流提取裝置( 杭州聚同 JTXT250S) 、渦旋振蕩器( 其林貝爾 01-861) 、  循環(huán)水式多用真空泵( 鄭州長城 SHB-III) 、旋 轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀( 鄭州長城 Ｒ-1001-VN) 、一次性塑料平板 ( 預(yù)滅菌) ，不銹鋼涂布棒，接種環(huán)，打孔器，微量移 液器( 5 ～ 10 μL) ，托盤天平，量筒，游標(biāo)卡尺等。

按流程制備紫草、白芷、忍冬藤 不同濃度醇提液及水煎液，具體方法如下: 1) 乙醇回 流提取法: 分別取紫草、白芷、忍冬藤粉劑 25 g，以 8 倍量 95% 乙醇浸泡 30 min 后，75 ℃ 加熱回流提取 1 h，濾過; 在剩余藥粉中加入 6 倍量 95% 乙醇繼續(xù) 回流 1 h，濾過。合并兩次回流提取后所得濾液，以 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀緩慢回收乙醇，剩余液體加入蒸餾水稀 釋至 8 倍量( 每毫升含藥量相當(dāng)于生藥 0. 125 g) ，進(jìn) 行封裝。依照上述方法，將乙醇濃度分別置換為 75% 、50% 、25% 、15% ，并取得相應(yīng)的藥液。2) 乙醇 浸泡提取法: 分別取紫草、白芷、忍冬藤粉劑 25 g，加 入 8 倍量 95% 乙醇浸泡 48 h 后，濾過，棄去剩余藥 粉，以旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀緩慢回收乙醇，剩余液體加入蒸餾 水稀 釋 至 8 倍 量 ( 每毫升含藥量相當(dāng)于生藥 0. 125 g) ，進(jìn)行封裝。3) 水煎提取法: 分別取紫草、 白芷、忍冬藤粉劑 25 g，加入 8 倍量蒸餾水浸泡 30 min 后，煎煮 1 h，靜置降溫沉淀后濾過封裝( 每毫升 含藥量相當(dāng)于生藥 0. 125 g) 。完成上述全部流程， 即制得 21 種不同藥液，分別標(biāo)記并放入 4 ℃ 冰箱保 存?zhèn)溆谩?/span>

取妥善保藏的金黃色葡萄球菌菌種，37 ℃ 無菌條件下培養(yǎng) 18 ～ 24 h，得指數(shù)生長期菌樣本，4 ℃ 冰箱保存。在小試管中 倒入 2 mL 生理鹽水，將接種環(huán)滅菌后，取一定量菌 樣本與生理鹽水配成 108 cfu /mL 菌懸液。調(diào)制滅 菌培養(yǎng)基并倒入一次性塑料培養(yǎng)皿中，每培養(yǎng)皿 10 mL，紫外照射冷卻后，使用微量移液器將 100 μL 菌懸液 加 入 平 板，涂 布 均 勻。用 外 徑 為 ( 5. 52 ± 0. 31) mm 的打孔器( 預(yù)滅菌) 對菌平板進(jìn)行打孔，每 板 4 孔?？组g距不少于 25 mm，孔中心距平皿邊緣 不少于 15 mm。取一種藥液，在菌平板的 3 個孔中 分別加入 50 μL 藥液，剩余 1 孔中加 50 μL 無菌生 理鹽水做為對照。37 ℃ 恒溫培育 24 h。選擇均勻 而完全無菌生長的抑菌環(huán)，以游標(biāo)卡尺測量抑菌圈 直徑。計算平均值。

藥液經(jīng)培養(yǎng)基中的瓊脂擴(kuò)散自然形成 不同濃度梯度，可以憑抑菌環(huán)的大小顯示不同藥液 的抑菌作用強(qiáng)弱。在相同質(zhì)量藥物的提取物中，紫 草回流提取時使用的乙醇濃度與相應(yīng)提取物的抑菌 效果呈正相關(guān)，說明紫草主要抑菌成分在有機(jī)相中 的溶解度高于水相; 而紫草水煎提取物抑菌能力優(yōu) 于 15% 乙醇回流提取物，提示紫草水煎液中抑菌有 效成分或與醇提液中抑菌有效成分不同。不同提取 方法所得白芷提取物間抑菌效果差異不顯著，說明 白芷抑菌成分在有機(jī)相和水相的溶解度接近，對熱 的穩(wěn)定性較好。忍冬藤回流提取時使用的乙醇濃度 與其相應(yīng)提取物抑菌效果呈負(fù)相關(guān)，使用 95% 乙醇 浸泡法及水煎法所獲提取物抑菌效果均顯著優(yōu)于 95% 乙醇加熱回流法提取物，說明抑菌成分在水相 中的溶解度高于有機(jī)相，長時間受熱易分解。